CuraKI

Xpert MTB-RIF

Xpert MTB/RIF

Kurs: Basvetenskap 6

TypAutomatiserad realtids-PCR (NAAT) i sluten kassett
DetekterarMycobacterium tuberculosis-komplexet + rifampicinresistens
SvarstidUnder 2 timmar, minimalt handhavande
MålsekvensrpoB-genens 81 bp “rifampicin resistance-determining region”
Sensitivitet~98 % vid direktpositiv sputum, ~68–75 % vid mikroskopinegativ
WHO-statusRekommenderat initialt diagnostiskt test vid TB-misstanke

Princip

  • Kartuschbaserad “sample-in, answer-out”-teknik (GeneXpert) där provberedning, DNA-extraktion, amplifiering och detektion sker i ett slutet system.
  • Sputum blandas med natriumhydroxid-isopropanolbuffert (2:1) som både avdödar bakterierna och löser slemmet — därför krävs ingen BSL-3-hantering.
  • Fem molecular beacon-prober täcker tillsammans hela RRDR i rpoB.
  • Utebliven eller fördröjd hybridisering av någon probe = mutation = rifampicinresistens.
  • Intern kontroll (sporulerad B. globigii) i varje kassett detekterar inhibition.

Utförande

  • Minst 1 mL sputum (helst 2 mL), morgonprov eller inducerat sputum.
  • Kan även användas på icke-respiratoriska prov: Likvor, lymfkörtelaspirat, ledvätska, pleuravätska, magsäcksaspirat hos barn, urin (för TB-LAM finns separat test).
  • RIF Ultra är den nya generationen: två extra multikopie-targets (IS6110, IS1081) och smältkurveanalys → ~10× lägre detektionsgräns (~16 CFU/mL).

Tolkning

ResultatBetydelse
MTB detected, Rif resistance NOT detectedTB utan rifampicinresistens — starta standardregim
MTB detected, Rif resistance DETECTEDSannolik MDR-TB — isolera, odla, gör utvidgad resistensbestämning
MTB detected, Rif resistance INDETERMINATEFör låg bakteriemängd för resistensavläsning
MTB NOT detectedUtesluter inte TB — odling krävs alltid
”Trace” (endast Ultra)Mycket låg bakteriebörda; tolkas i klinisk kontext, vanligt vid barn-TB, HIV och tidigare behandlad TB

Styrkor

  • Drastiskt kortare tid till behandling än odling (som tar 2–6 veckor).
  • Detekterar rifampicinresistens samtidigt — rifampicinresistens fungerar som surrogatmarkör för MDR-TB eftersom > 90 % av rifampicinresistenta stammar även är isoniazidresistenta.
  • Betydligt bättre än mikroskopi, särskilt vid HIV-samsjuklighet där bakteriebördan är låg.
  • Kräver ingen odlingslaboratoriekompetens; kan placeras i perifera vårdenheter.

Begränsningar

  • Ersätter inte odling — odling behövs för fullständig resistensbestämning (isoniazid, fluorokinoloner, injektionsmedel) och för behandlingsuppföljning.
  • Detekterar DNA från döda bakterier → kan vara positivt i månader efter avslutad behandling; olämpligt för att bedöma behandlingssvar.
  • Sämre sensitivitet vid extrapulmonell TB, särskilt Tuberkulös meningit (~50–70 %) och pleural TB.
  • Missar sällsynta rifampicinresistensmutationer utanför RRDR samt tysta mutationer som ger falskt resistensutslag.
  • Falskt positiv rifampicinresistens vid låg prevalens av resistens — bekräfta alltid med sekvensering eller fenotypisk odling.
  • Kräver stabil elektricitet, kalibrering och temperaturkontroll; kassetter är dyra.

Plats i TB-diagnostiken

  • IGRA/ESAT-6-baserade test identifierar immunologiskt minne — kan inte skilja latent från aktiv sjukdom.
  • Mikroskopi (auramin/Ziehl-Neelsen) är snabb men okänslig och artospecifik.
  • Xpert ger snabb artspecifik diagnos plus resistensinformation.
  • Odling förblir guldstandard för fullständig resistensbestämning.
  • Fortsatt resistensutredning görs med Xpert MTB/XDR eller line probe assay (MTBDRsl) för fluorokinoloner och andrahandsmedel.

Klinisk pärla

Vid misstänkt Tuberkulös meningit ska Xpert Ultra köras på ett så stort likvorvolymprov som möjligt (helst 6–10 mL, centrifugerat). Sensitiviteten stiger tydligt med volymen — men ett negativt svar får aldrig fördröja empirisk behandling, eftersom mortaliteten stiger för varje dags fördröjning.

Tenta-fokus

Kunna att Xpert detekterar rifampicinresistens genom mutationer i rpoB-genens RRDR, att rifampicinresistens är surrogatmarkör för MDR-TB, och att ett negativt Xpert inte utesluter tuberkulos — odling måste alltid tas. Kom också ihåg att testet inte kan användas för att följa behandlingssvar eftersom det detekterar DNA från döda bakterier.

Kopplingar

Graph View