ISH

Kurs: Basvetenskap 5 Moment 2

Vad är det?

• In situ-hybridisering — en molekylärpatologisk metod där en märkt nukleinsyresond binder komplementärt till DNA eller RNA direkt i vävnadssnittet eller cellutstryket, med bevarad morfologi.
• Varianter efter detektionssätt: FISH (fluorescens), CISH (kromogen, ljusmikroskop), SISH (silver), DISH (dual-color, två prober samtidigt).

Princip

• Vävnaden permeabiliseras, DNA denatureras, sonden hybridiseras och överskott tvättas bort.
• Signalen räknas per cellkärna. Vid genamplifiering används en centromersond för samma kromosom som intern kontroll — kvoten mellan gensignal och centromersignal skiljer äkta amplifiering från polysomi.

Tenta-fokus

Den centrala styrkan hos ISH är att den bevarar rumslig information. PCR och NGS kräver att vävnaden mals ner, vilket blandar tumörceller med stroma och immunceller. ISH visar i vilken cell förändringen sitter, vilket gör metoden överlägsen vid heterogena tumörer och vid låg tumörcellandel. Nackdelen är den spegelvända: ISH kan bara svara på den fråga man ställt, en sond i taget.

Kliniska tillämpningar

Fråga	Exempel
Genamplifiering	HER2 vid Bröstcancer och ventrikelcancer; MYCN vid Neuroblastom
Translokation/fusion	BCR-ABL, ALK och ROS1 vid NSCLC, EWSR1 vid Ewingsarkom, IGH-BCL2 vid Follikulärt lymfom
Deletion	1p19q-kodeletion vid Oligodendrogliom, 17p (TP53) vid KLL
Virus	EBER för EBV, högrisk-HPV-RNA
Genuttryck	RNA-ISH (RNAscope) för PD-L1, transkriptdetektion

HER2 som modellfall

• IHK mäter protein, ISH mäter genkopietal.
• IHK 0/1+ = negativ, 3+ = positiv, 2+ = ekvivokt → reflextestas med ISH.
• HER2/CEP17-kvot ≥2,0 eller ≥6 kopior per kärna = amplifierat.

Klinisk pärla

ISH för HER2 är själva prototypen för en prediktiv — inte prognostisk — biomarkör. Före Trastuzumab var HER2-amplifiering enbart ett dåligt prognostiskt tecken; efter trastuzumab blev samma fynd en av bröstcancerns bästa behandlingsprediktorer. Att en biomarkörs betydelse kan vändas helt av att det kommer ett läkemedel är värt att hålla i minnet när man tolkar äldre prognosdata.

Styrkor och begränsningar

• Styrkor: fungerar på formalinfixerad paraffininbäddad vävnad, bevarar morfologi, kvantitativ, hög specificitet.
• Begränsningar: en fråga per sond, arbetsintensiv, kräver fluorescensmikroskop (FISH), dyrare per analys än IHK, kan missa atypiska breakpoints.

Tenta-fokus

Testvalet följer en logisk trappa: IHK är billig och används som screening när proteinuttrycket är en god proxy (ALK, MMR-proteiner, HER2). ISH används för att bekräfta i ekvivoka fall och för strukturella förändringar. NGS används när man behöver kartlägga många gener samtidigt eller söker punktmutationer. Att motivera varför man valde en viss metod till en viss frågeställning är en vanligare tentafråga än metodens tekniska detaljer.

Kopplingar

Relaterat: Immunhistokemi, HER2, 1p19q-kodeletion, Nästa generations sekvensering, Molekylärpatologi, Trastuzumab