PCR (Polymerase Chain Reaction)
Kurs: Basvetenskap 5 Moment 1, MDBI
Vad är det?
PCR är en laboratorieteknik som exponentiellt amplifierar (kopierar) specifika segment av DNA eller RNA, vilket möjliggör detektion av mycket små mängder genetiskt material.
Mekanism
Genom upprepade cykler av uppvärmning och avkylning, med hjälp av specifika primers och ett värmetåligt DNA-polymeras, fördubblas mängden av den specifika DNA-sekvensen för varje cykel, vilket snabbt genererar miljontals kopior från en initialt mycket liten mängd startmaterial.
Klinisk relevans & Diagnostik
Används brett inom onkologi: för att bekräfta klonalitet vid lymfom (påvisar att alla celler delar samma B- eller T-cellsreceptorgenrearrangemang), för att kvantitativt monitorera BCR-ABL1-nivåer vid KML-behandling, samt för att detektera specifika translokationer eller mutationer.
Klinisk pärla
PCR:s kvantitativa förmåga (kan mäta exakt mängd, inte bara närvaro/frånvaro) gör den särskilt värdefull för att monitorera behandlingssvar över tid (t.ex. BCR-ABL1-nivåer vid KML), inte bara för initial diagnos.
Klinisk kemi
- Virusdiagnostik med PCR-teknik: provtagning med “viruspinne” i näsa/nasofarynx eller svalg vid misstänkt covid-19. Snabbtester kan ersätta PCR-metod, men PCR är referensmetoden.
- S-Coronavirus SARS-CoV-2-RNA: positiv serum-PCR är starkt associerad med behov av högre vårdnivå och död — PCR-positivitet i serum är alltså inte bara ett diagnostiskt utan även ett prognostiskt fynd.
- DNA-baserad koagulationsdiagnostik utförs med PCR-teknik på B-DNA:
- Faktor V-genmutation (Leiden) vid APC-resistens
- Protrombin (faktor II) 20210G→A — normal genotyp 20210 G/G, mutationen benämns PTHRA²⁰²¹⁰
- MTHFR C677→T vid hyperhomocysteinemi
- RFLP (restriction fragment length polymorphisms) kan påvisa anlagsbärare för hemofili redan på fosterstadiet; faktor VIII-analys spårar endast 70–80 % av anlagsbärarna
- Fördel med genotypning framför funktionstest: genotypen påverkas inte av pågående antikoagulantiabehandling, inflammation, graviditet eller akut trombos — till skillnad från funktionella koagulationsanalyser.
- Preanalytiskt: DNA-analys tas i EDTA-rör (helblod) och är okänslig för tid till centrifugering, medan funktionella koagulationsanalyser kräver citratplasma och snabb hantering eller frysning vid −20 °C.
Klinisk pärla
Vid APC-resistens finns två vägar: funktionell APC-kvot — koagulationstid med och utan tillsatt aktiverat protein C, där tiden med protein C normalt ska vara minst dubbelt så lång — och PCR-baserad genotypning av faktor V Leiden. Den funktionella metoden störs av DOAK och warfarin; genotypningen gör det inte.
Kopplingar
Del: 03 Klinisk Kemi Avsnitt: 05 Koagulation och Hemostas
Relaterat: FISH, BCR-ABL1, KML, IHC, Faktor V Leiden, Protrombinmutationen, DNA, Covid-19