RT-QuIC

Kurs: Basvetenskap 6

Typ	Diagnostisk metod — ultrasensitiv amplifiering av Prioner
Fullnamn	Real-Time Quaking-Induced Conversion
Provmaterial	Likvor, nasalt borstprov från olfaktoriskt epitel
Prestanda	Sensitivitet ~92–96 %, specificitet >98 % vid Creutzfeldt-Jakobs sjukdom
Svarstid	24–90 timmar

Vad är det?

• In vitro-metod som utnyttjar prionens egen förmåga att omvandla normalt protein till felveckad form — en proteinmotsvarighet till PCR.
• Detekterar sjukdomsassocierat PrPSc i koncentrationer ned mot attogram-nivå.
• Ingår sedan 2017 i de internationella diagnoskriterierna för probable sporadisk CJD.

Princip

• Rekombinant normalt prionprotein (PrPC, ofta hamster- eller bankvolsekvens) tillsätts i stor mängd som substrat.
• Ett minimalt antal PrPSc-partiklar i patientprovet fungerar som kärna (seed) och templerar omveckning av substratet till Betaflak-rik amyloid.
• Fibrillerna binder Tioflavin T, vars fluorescens ökar kraftigt vid inbindning — läses av i realtid.
• Cykler av skakning (“quaking”) och vila fragmenterar fibrillerna → fler fria ändar → exponentiell autokatalytisk tillväxt.

Utförande

• Provet späds och sätts till 96-brunnsplatta med substrat, tioflavin T, salt och detergent.
• Inkuberas vid 42–55 °C med intermittent skakning; fluorescens mäts var 15:e minut i 24–90 timmar.
• Varje prov körs i fyra replikat — positivt svar kräver oftast ≥2 av 4 brunnar över tröskel.

Tolkning

Utfall	Innebörd
≥2/4 replikat över tröskel	Positivt — talar starkt för prionsjukdom
1/4 replikat	Otolkbart, ta nytt prov
0/4	Negativt — utesluter inte helt, upprepa vid stark klinisk misstanke

• Positivt likvor-RT-QuIC har högre specificitet än både 14-3-3-protein och Tau i likvor, som endast speglar ospecifik neuronal skada.
• Nasalt borstprov ger något högre sensitivitet än likvor men är mer invasivt och tekniskt krävande.

Fallgropar

• Blodtillblandat likvor hämmar reaktionen — Hemoglobin stör tioflavinsignalen. Ta om provet vid stickblödning.
• Sensitiviteten är lägre vid variant CJD (vCJD) och vid vissa genetiska prionsjukdomar som Fatal familjär insomni.
• Metoden säger inget om prionstam eller kodon 129-genotyp — komplettera med PRNP-sekvensering.
• Ett negativt svar tidigt i förloppet utesluter inte sjukdom; upprepa efter 4–8 veckor.

Klinisk kontext

• Utreds vid snabbt progredierande Demens med Myoklonier, Ataxi och visuella störningar.
• Kombineras med MR hjärna (DWI: kortikal ribboning, pulvinartecken) och EEG (periodiska skarpa vågkomplex).
• Har till stor del ersatt behovet av Hjärnbiopsi för att nå diagnosen probable CJD.

Klinisk pärla

Vid snabbt progredierande demens är den viktigaste uppgiften att inte missa en behandlingsbar orsak — Autoimmun encefalit, Hashimotoencefalopati, Neuroborrelios, Vitamin B12-brist, HIV och Neurosyfilis. Ta RT-QuIC parallellt med, inte istället för, den utredningen.

Tenta-fokus

Skilj på markörer: 14-3-3 och tau är ospecifika markörer för neuronal destruktion (stiger även vid stroke och encefalit), medan RT-QuIC detekterar själva den patogena prionkonformationen och därför är sjukdomsspecifik. Prioner inaktiveras inte av vanlig autoklavering — kräver 134 °C i 18 min och/eller 1 M NaOH.

Kopplingar

• Prioner — infektiösa proteinpartiklar utan nukleinsyra
• Creutzfeldt-Jakobs sjukdom — huvudsaklig indikation
• Scrapie — prototypisk prionsjukdom hos får
• PrPSc — den betaflaksrika, proteaseresistenta isoformen
• PRNP — genen på kromosom 20, kodon 129-polymorfism styr fenotyp
• Likvoranalys — provtagningsvägen