ELISA

Kurs: Basvetenskap 6

Vad är det?

• Enzyme-Linked Immunosorbent Assay – en immunologisk metod för att påvisa och kvantifiera antikroppar eller antigen i ett prov, med hjälp av ett enzymkopplat detektionssteg som ger färgomslag.

Varför är det viktigt / Mekanism

• Grundvarianter:
  • Indirekt ELISA – antigen fastsatt i brunnen fångar patientens antikroppar; ett enzymmärkt anti-humant IgG detekterar. Används för serologi.
  • Sandwich-ELISA – en fångstantikropp binder antigenet, en andra märkt antikropp detekterar. Används för antigenpåvisning (t.ex. HIV p24).
  • Kompetitiv ELISA – provets analyt konkurrerar med märkt analyt; signalen är omvänt proportionell mot koncentrationen.
• Signal genereras av enzym (HRP eller alkaliskt fosfatas) som omvandlar substrat till färgad produkt, avläst spektrofotometriskt.

Klinisk relevans & Diagnostik

• HIV-diagnostik i två steg: först ett känsligt screeningtest – idag fjärde generationens kombinationstest som påvisar både anti-HIV-antikroppar och p24-antigen – därefter ett konfirmerande test (immunoblot eller HIV-1/2-diskriminerande test) på ett nytt prov.
• Logiken bakom två steg: screening väljs för hög sensitivitet (missa ingen), konfirmering för hög specificitet (bekräfta att det stämmer). I en lågprevalent population blir det positiva prediktiva värdet av enbart ett screeningtest lågt, även om testet är utmärkt.

Tenta-fokus

Fönsterperioden är tiden mellan smitta och positivt test. Fjärde generationens test förkortar den till ungefär 2–3 veckor (p24 kommer före antikroppar), mot 4–6 veckor för rena antikroppstest. Ett negativt test inom fönsterperioden utesluter inte smitta – vid misstänkt akut infektion används HIV-RNA (PCR), som blir positivt redan efter ca 10 dagar.

Klinisk pärla

Repetera Bayes: ett test med 99 % sensitivitet och 99 % specificitet i en population med 0,1 % prevalens ger ett positivt prediktivt värde på bara cirka 9 %. Det är hela skälet till konfirmeringstest – och en insikt som gäller all diagnostik, inte bara HIV.

Kopplingar

Relaterat: HIV, Serologi, PCR, Sensitivitet och specificitet, Positivt prediktivt värde, Antikroppar, Antiviral behandling