Ziehl-Neelsen
Kurs: Basvetenskap 6
Vad är det?
- Differentialfärgning för att påvisa syrafasta bakterier (acid-fast bacilli, AFB) i mikroskopi.
- Standardmetod vid misstänkt Tuberkulos och andra mykobakteriella infektioner.
- Syrafasthet beror på ett vaxartat, lipidrikt cellhölje med mykolsyror som binder färgämnet och motstår avfärgning.
Princip
- Mykolsyrorna i mykobakteriernas cellvägg gör den ogenomtränglig för vanlig Gramfärgning — mykobakterier färgas dåligt eller inte alls med Gram.
- Karbolfuchsin drivs in i cellväggen med värme (klassisk metod) eller detergent (Kinyoun, “kall” metod).
- När färgen väl bundit kan den inte tvättas ur av syra-alkohol — därav “syrafast”.
Utförande
- Utstryk fixeras på objektsglas.
- Karbolfuchsin (rött) appliceras, preparatet värms till ångbildning i 5 minuter.
- Avfärgning med syra-alkohol (saltsyra i etanol).
- Kontrastfärgning med Metylenblått eller malakitgrönt.
Tolkning
- Syrafasta stavar: röda/rosa stavar mot blå eller grön bakgrund.
- Icke-syrafasta celler och bakgrund färgas blå/grön.
- Kvantifiering enligt WHO-skala (1+ till 3+) — korrelerar med Smittsamhet vid Lungtuberkulos.
- Positivt fynd i Sputum = patienten är smittsam och kräver luftburna isoleringsåtgärder.
Varianter och alternativ
- Kinyoun: kall metod, utan uppvärmning.
- Auramin-rodamin (Fluorescensmikroskopi): känsligare och snabbare screening — används på de flesta laboratorier idag; positiva prov konfirmeras ofta med Ziehl-Neelsen.
- Modifierad (svag) syrafasthet: Nocardia, Cryptosporidium, Cyclospora, Isospora — avfärgning med svagare syra.
Fallgropar
- Låg känslighet: kräver 5 000–10 000 bakterier per ml sputum → ett negativt prov utesluter INTE Tuberkulos.
- Skiljer inte M. tuberculosis-komplexet från icke-tuberkulösa mykobakterier — kräver Odling, PCR eller Nukleinsyraamplifiering.
- Döda bakterier färgas också → kan vara positiv under pågående behandling utan att patienten är smittsam.
- Kontaminerande miljömykobakterier i kranvatten kan ge falskt positiva fynd.
Klinisk pärla
Vid misstänkt lungtuberkulos tas tre sputumprov, helst morgonprov olika dagar. Kombinera alltid med snabb molekylär diagnostik (RIF) som både bekräftar M. tuberculosis-komplexet och detekterar rifampicinresistens inom två timmar.
Tenta-fokus
Kom ihåg att syrafastheten beror på mykolsyror i cellväggen, och att Ziehl-Neelsen även fångar Nocardia och vissa parasiter (Cryptosporidium). Negativ direktmikroskopi utesluter inte tuberkulos — Odling är fortfarande gyllene standard.
Kopplingar
- M. tuberculosis-komplexet — huvudsaklig målorganism
- Tuberkulos — sjukdomen metoden används för
- Mykolsyra — molekylär grund för syrafasthet
- Gramfärgning — den generella bakteriefärgningen som inte fungerar på mykobakterier