Löwenstein-Jensen
Kurs: Basvetenskap 6
| Typ | Selektivt fast odlingsmedium för mykobakterier |
| Bas | Koagulerad ägg, glycerol, potatismjöl, malakitgrönt |
| Selektion | Malakitgrönt hämmar övrig bakterieflora |
| Växttid | 3–8 veckor vid 37 °C |
| Utbyte | Guldstandard tillsammans med flytande buljongodling |
Vad är det?
- Löwenstein-Jensen-medium (LJ) är det klassiska fasta äggbaserade substratet för odling av Mycobacterium tuberculosis och andra mykobakterier.
- Odling är fortfarande referensmetod för diagnos av Tuberkulos eftersom den möjliggör artbestämning och fenotypisk resistensbestämning.
Sammansättning och princip
| Komponent | Funktion |
|---|---|
| Koagulerad hönsägg | Protein- och lipidkälla, ger fast konsistens vid inspissation |
| Glycerol | Kolkälla — gynnar M. tuberculosis |
| Potatismjöl (asparagin) | Kvävekälla, neutraliserar toxiska fettsyror |
| Malakitgrönt | Selektivt — hämmar grampositiva och gramnegativa bakterier |
| Mineralsalter | Tillväxtfaktorer |
- Pyruvat ersätter glycerol när Mycobacterium bovis misstänks — den arten hämmas av glycerol.
- Mediet steriliseras genom inspissation (upprepad upphettning till 85 °C) i stället för autoklavering, som skulle förstöra äggproteinerna.
Utförande
- Provmaterial: sputum tre morgnar i rad, ventrikelsköljvätska hos barn, bronksköljvätska, urin, likvor, vävnad, benmärg.
- Dekontaminering med NaOH och N-acetylcystein krävs för icke-sterila prov — det avdödar snabbväxande flora medan mykobakteriernas vaxartade cellvägg står emot.
- Inkuberas vid 37 °C i upp till 8 veckor innan slutsvar negativt. M. marinum och M. ulcerans kräver 30 °C.
- Före odling görs alltid direktmikroskopi med Ziehl-Neelsen eller auraminfärgning — snabbt men kräver 10⁴–10⁵ bakterier/mL.
Tolkning
- M. tuberculosis växer som torra, skrovliga, gulbeige “brödsmuleliknande” kolonier (eugoniska, rough, buff).
- M. bovis ger tunna, platta kolonier (dysgoniska).
- Pigmenterade kolonier talar för atypiska mykobakterier: fotokromogener (M. kansasii — pigment efter ljusexponering), skotokromogener (M. gordonae — pigment i mörker), icke-kromogener (M. avium-komplexet).
- Bekräftelse med MALDI-TOF, nukleinsyrahybridisering eller sekvensering.
Alternativ och komplement
| Metod | Kommentar |
|---|---|
| MGIT (flytande buljong) | Automatisk fluorescensdetektion, positiv på 1–3 veckor — högre känslighet, används parallellt med LJ |
| Middlebrook 7H10/7H11 | Agarbaserat, genomskinligt, tillåter tidig mikrokolonidetektion |
| RIF | PCR med samtidig detektion av rifampicinresistens på 2 timmar — WHO-rekommenderad initial metod |
| Ziehl-Neelsen / auramin | Snabb mikroskopi, låg känslighet, avgör smittsamhet |
| IGRA och Tuberkulinprövning | Immunologiska test — påvisar exposition, inte aktiv sjukdom |
Klinisk relevans
- Positiv odling krävs för fenotypisk resistensbestämning mot Isoniazid, Rifampicin, Pyrazinamid och Etambutol — avgörande vid misstänkt MDR-TB.
- Odlingsomslag till negativt efter 2 månaders behandling är ett viktigt prognostiskt mått.
- Sputumodling används för att avgöra när patienten inte längre är smittsam och isolering kan hävas.
Klinisk pärla
Skriv alltid frågeställning tuberkulos på remissen. Laboratoriet måste då använda specialmedium, dekontaminering, förlängd inkubationstid och skyddsnivå 3 — ett vanligt odlingsrör inkuberas bara två dygn och kastas, varvid diagnosen missas helt.
Tenta-fokus
Malakitgrönt är den selektiva komponenten och glycerol den kolkälla som gynnar M. tuberculosis. Vid misstanke om M. bovis måste glycerol bytas mot pyruvat. Kom också ihåg växttiden — upp till 8 veckor — vilket är skälet till att behandling påbörjas på klinisk misstanke och mikroskopi, långt före odlingssvaret.
Kopplingar
- Mycobacterium tuberculosis — huvudorganismen mediet är avsett för
- Tuberkulos — sjukdomen som diagnostiseras
- Tuberkulinprövning — immunologiskt komplement
- Ziehl-Neelsen — snabb mikroskopisk metod
- Isoniazid — preparat som resistensbestäms på odlingen