Direktmikroskopi
Kurs: Basvetenskap 6
| Typ | Snabb mikrobiologisk basmetod på ofärgat eller färgat provmaterial |
| Svarstid | 15–60 minuter — snabbaste mikrobiologiska svaret som finns |
| Vanligaste färgning | Gramfärgning; därtill ZN, KOH-preparat, Giemsa |
| Styrka | Ger omedelbar terapistyrning och bedömning av provkvalitet |
| Svaghet | Låg känslighet — kräver 10⁴–10⁵ bakterier/mL |
Vad är det?
- Direktmikroskopi innebär att provmaterialet undersöks i mikroskop utan föregående odling, antingen som våtpreparat eller efter färgning.
- Metoden ger svar inom minuter och används för att styra empirisk terapi innan odlingssvar finns.
Princip
- Ljusfältsmikroskopi efter färgning: kontrast skapas av att färgämnet binder till cellstrukturer.
- Fasknontrast/mörkfält: rörliga organismer synliggörs utan färgning (t.ex. Treponema pallidum, Trichomonas vaginalis).
- Fluorescensmikroskopi: auraminfärgning av Mykobakterier, kalkofluorvitt för svamp, immunfluorescens för Pneumocystis jirovecii.
Vanliga tillämpningar
| Prov | Metod | Nyckelfynd |
|---|---|---|
| Likvor | Gram + Tuschpreparat | Grampositiva diplokocker = Pneumokocker; kapsel = Cryptococcus |
| Sputum | Gram, ZN/auramin | >25 leukocyter och <10 skivepitel per synfält = duglig kvalitet |
| Urin | Fasnontrast | Bakteriuri, leukocyter, cylindrar |
| Pus/sårsekret | Gram | Snabb vägledning aerob/anaerob, kocker/stavar |
| Faeces | Jod, ZN modifierad | Cystor, Oocystor, maskägg |
| Hud/naglar | KOH-preparat | Hyfer och sporer vid Dermatofytos |
| Vaginalsekret | Våtpreparat | Clue cells vid Bakteriell vaginos, trichomonader |
| Blod | Giemsa, tjock droppe | Malaria-parasiter, Trypanosoma, Borrelia recurrentis |
Tolkning
- Fynd av bakterier i normalt sterilt material (likvor, ledvätska, blod) är alltid patologiskt.
- I icke-sterila material måste fyndet vägas mot normalflora och mot mängden leukocyter.
- Gramfärgningens fyra grundfrågor: grampositiv eller gramnegativ, kock eller stav, arrangemang (kedja, klase, diplo), och närvaro av inflammatoriska celler.
- Rikligt med bakterier utan leukocyter talar för kolonisation eller kontamination; rikligt med leukocyter utan bakterier kan tala för Anaerober, Mykobakterier eller föregående antibiotika.
Fallgropar
- Låg känslighet: negativ direktmikroskopi utesluter aldrig infektion. Vid Tuberkulos är Direktmikroskopi positiv i endast ca 50–60 % av odlingspositiva fall.
- Överdriven gramfärgning avfärgar grampositiva så de framstår som gramnegativa — vanligt fel vid gamla prover.
- Mykoplasma, Chlamydia, Legionella och Rickettsia syns inte alls i gramfärgning.
- Kontamination av normalflora vid dålig provtagning (svalgsekret i “sputum”).
- Kräver erfaren avläsare — resultatet är operatörsberoende.
Klinisk pärla
Vid misstänkt Bakteriell meningit ger gramfärgning av likvor svar på 20 minuter och kan direkt bekräfta pneumokock (grampositiva diplokocker) eller Meningokocker (gramnegativa diplokocker). Men vänta aldrig på svaret — antibiotika ska ges inom en timme.
Tenta-fokus
Sputumprovets kvalitetsbedömning är en klassisk fråga: >10 skivepitelceller per synfält (10x) betyder salivkontamination och provet ska förkastas. Kom också ihåg detektionsgränsen: direktmikroskopi kräver 10⁴–10⁵ organismer/mL, medan odling detekterar enstaka bakterier och PCR ännu färre.
Kopplingar
- Gramfärgning — vanligaste färgmetoden
- Odling — komplement med högre känslighet men längre svarstid
- PCR — snabb och känslig men säger inget om resistens eller cellbild
- Ziehl-Neelsen-färgning — för syrafasta stavar