Odling

Kurs: Basvetenskap 6

Vad är det?

• Mikrobiologisk metod där ett prov appliceras på näringsmedium så att levande mikroorganismer förökar sig till synliga kolonier.
• Fortfarande gyllene standard för de flesta bakteriella infektioner — den enda metoden som ger både artdiagnos och fullständig resistensbestämning.
• Kan avse bakterieodling, svampodling, virusodling i cellkultur eller odling av parasiter.

Princip

• Ett prov innehållande levande mikrober inkuberas under kontrollerad temperatur, gasmiljö och tid.
• En bakterie ger upphov till en klon = en koloni, vilket ger både renkultur och kvantifiering (CFU).
• Mediumval styr vad som växer:
  • Icke-selektiva: blodagar, hematinagar (chokladagar för Haemophilus influenzae).
  • Selektiva: cled-agar och MacConkey-agar (gramnegativa), Thayer-Martin (Neisseria gonorrhoeae), Sabouraud-agar (svamp), Löwenstein-Jensen (Mycobacterium tuberculosis).
  • Anrikning: buljong för fåtaliga bakterier, blododlingsflaskor aerobt och anaerobt.
• Gasmiljö: aerobt, anaerobt (för anaerober som Bacteroides fragilis) eller kapnofilt (5 % CO2).

Utförande

• Provtagning ska ske före antibiotikastart — detta är den enskilt viktigaste praktiska regeln.
• Blododling: minst 2 set från olika stickställen, 8–10 ml per flaska. Volymen är den viktigaste faktorn för sensitivitet. Noggrann huddesinfektion mot kontamination med koagulasnegativa stafylokocker.
• Urinodling: mittstråleprov, växt ≥10^5 CFU/ml tolkas som signifikant bakteriuri (lägre gränser vid symtomatisk cystit hos kvinnor och vid suprapubisk punktion).
• Nasofarynxodling, sårodling, likvorodling, ledvätska, fecesodling — transportmedium och snabb transport är avgörande, särskilt för anaerober och Neisseria.

Tolkning

• Kolonimorfologi, hemolys (alfa, beta, gamma), lukt och Gramfärgning ger första vägledning.
• Artbestämning idag oftast med MALDI-TOF (minuter) eller biokemiska paneler.
• Resistensbestämning med lappdiffusion eller MIC-bestämning, tolkat mot EUCAST-brytpunkter (S/I/R).
• Skilj mellan kolonisation, kontamination och infektion — svaret måste alltid tolkas mot kliniken.

Fallgropar

• Antibiotika före provtagning ger falskt negativ odling.
• Svårodlade agens växer inte på standardmedium: Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia trachomatis, Legionella pneumophila (kräver BCYE-agar), Bartonella, Treponema pallidum (går ej att odla), Coxiella burnetii, virus. Här krävs PCR, serologi eller antigentest.
• Mycobacterium tuberculosis tar 2–6 veckor i odling — PCR behövs för snabb handläggning.
• Långsam transport dödar anaerober och känsliga arter; överväxt av normalflora maskerar patogen.
• Positiv odling från icke-steril lokal (svalg, hud, sår) betyder inte nödvändigtvis infektion.

Klinisk pärla

En enda blododling med koagulasnegativa stafylokocker av två set är sannolikt kontamination; växt i båda seten hos patient med central venkateter eller klaffprotes talar för äkta bakteriemi. Antal positiva flaskor och tid till positivitet är dina bästa tolkningsverktyg.

Tenta-fokus

Odla före antibiotika — men fördröj aldrig behandling vid septisk chock eller misstänkt bakteriell meningit. Vid meningit: ta blododling direkt, ge antibiotika, gör lumbalpunktion så snart det är säkert; PCR på likvor är fortfarande positiv efter antibiotikastart.

Kopplingar

• Blododling — viktigaste odlingstypen vid sepsis
• Resistensbestämning — förutsätter odling
• PCR — komplement vid svårodlade agens
• Anaerober — kräver särskild transport och miljö
• MALDI-TOF — snabb artbestämning
• Gramfärgning — parallell snabbmetod