Giemsa
Kurs: Basvetenskap 6
| Typ | Cytologisk/mikrobiologisk färgningsmetod |
| Princip | Romanowsky-färgning: metylenblått + eosin + azur |
| Färgar | Kärnor purpurröda, cytoplasma blå, granula differentierat |
| Huvudanvändning | Malaria-diagnostik, Blodutstryk, benmärg |
| Guldstandard för | Artbestämning av Plasmodium |
Princip
- Giemsa tillhör Romanowsky-färgningarna och bygger på en kombination av en basisk (metylenblått/azur B) och en sur (eosin Y) färgkomponent.
- Azur B binder till negativt laddat DNA och RNA → kärnor och ribosomrik cytoplasma blir blå-purpur.
- Eosin binder till positivt laddade proteiner som hemoglobin → erytrocyter blir rosa-röda.
- Azur–eosin-komplexet ger den karakteristiska “Romanowsky-effekten” — den purpurfärgade kärnkromatinen.
- Färgningen är pH-känslig: buffert pH 7,2 krävs, annars missas Schüffners prickar vid P. vivax.
Utförande
- Tunt utstryk: fixeras i metanol → färgas 10–20 min i utspädd Giemsa (3–5 %) → artbestämning och parasitemi i procent.
- Tjock droppe (tjockt utstryk): fixeras inte — erytrocyterna hemolyseras, vilket koncentrerar parasiterna 20–40 gånger. Används för att detektera låggradig parasitemi.
- Snabbfärgning (10 % Giemsa i 10 min) används akut vid malariamisstanke.
Tolkning — vad Giemsa visar
| Fynd | Diagnos |
|---|---|
| Ringformer, banangametocyter, hög parasitemi | Plasmodium falciparum |
| Förstorade erytrocyter, Schüffners prickar, amöboid trofozoit | Plasmodium vivax |
| Maltakorsschizonter, bandformer | Plasmodium malariae |
| Intracellulära amastigoter i makrofager | Leishmania |
| Trypomastigoter fritt i plasma | Trypanosoma |
| Intracellulära inklusionskroppar | Chlamydia trachomatis |
| ”Safety pin”-morfologi i mononukleära celler | Histoplasma capsulatum |
| Borrelia-spiroketer i blod | Borrelia recurrentis (återfallsfeber) |
Fallgropar
- En negativ utstryk utesluter inte malaria — upprepa var 12:e–24:e timme, minst tre gånger under 48 timmar.
- Fel buffert-pH döljer Schüffners prickar och försvårar artbestämning.
- Trombocyter som ligger ovanpå erytrocyter kan misstas för ringformer.
- Autofluorescens och artefakter från smutsiga objektglas ger falskt positiva svar.
- Vid låg parasitemi (< 0,001 %) missas ofta parasiten — komplettera med snabbtest (RDT, HRP2/pLDH) eller PCR.
- P. falciparum kan ge falskt låg parasitemi i perifert blod pga Sekvestrering i kapillärbädden.
Jämförelse med andra färgningar
| Metod | Målstruktur |
|---|---|
| Giemsa | Blodparasiter, cellmorfologi |
| Gramfärgning | Bakteriell cellvägg — grampositiv/negativ |
| Ziehl-Neelsen | Syrafasta stavar (Mycobacterium tuberculosis) |
| Silverfärgning (Grocott) | Svamp, Pneumocystis jirovecii |
| Direktmikroskopi med KOH | Dermatofyter i hud/nagel |
Klinisk pärla
Vid misstänkt malaria hos en hemvändande resenär ska både tunt och tjockt utstryk beställas akut, dygnet runt — svar inom en timme. P. falciparum kan gå från lindrig sjukdom till Cerebral malaria och död på under ett dygn; parasitemi > 5 % är kriterium för svår malaria och intravenös Artesunat.
Tenta-fokus
Tjock droppe = hög känslighet (detektion), tunt utstryk = artbestämning och parasitemi. Fixera aldrig den tjocka droppen med metanol — då hemolyseras inte erytrocyterna och hela poängen försvinner.
Kopplingar
- Malaria — huvudindikationen för metoden
- Plasmodium falciparum — den farligaste arten
- Blodutstryk — grundläggande hematologisk metod
- Direktmikroskopi — bredare metodfamilj
- Ziehl-Neelsen — komplementär färgning för mykobakterier