Ziehl-Neelsen-färgning

Kurs: Basvetenskap 6

Vad är det?

• Syrafast färgning - den klassiska mikroskopimetoden för att påvisa mykobakterier, framför allt Mycobacterium tuberculosis.
• Bygger på att mykobakteriens mykolsyrerika cellvägg behåller färgämnet även efter avfärgning med syra och alkohol - därav benämningen syrafast.
• Alternativet auramin-rodaminfärgning (fluorescens) är känsligare och snabbare att avläsa och har i stor utsträckning ersatt ZN i moderna laboratorier.

Varför är det viktigt / Mekanism

• Stegen:
  1. Karbolfuksin (rött) appliceras och värms (eller används i högre koncentration vid kallmetoden, Kinyoun) - värmen och fenolen gör vaxlagret genomträngligt så att färgämnet kan tränga in.
  2. Avfärgning med syraalkohol - alla icke-syrafasta celler tappar färgen; mykobakterierna behåller den eftersom mykolsyran låser in färgämnet när preparatet svalnat.
  3. Kontrastfärgning med metylenblått eller malakitgrönt.
• Resultat: röda stavar mot blå bakgrund. Mykobakterier ses ofta som lätt böjda, pärlbandsliknande stavar, ibland i knippen (“cording” - ett virulenstecken kopplat till cordfaktor/trehalosdimykolat).
• Modifierad ZN (svagare syra) används för Nocardia, som är delvis syrafast, och för oocystor av Cryptosporidium, Cyclospora och Cystoisospora.

Klinisk relevans & Diagnostik

• Sensitivitet är metodens svaghet: det krävs 10⁴-10⁵ bakterier per ml sputum för ett positivt fynd. Ungefär hälften av alla odlingsverifierade lungtuberkuloser är direktmikroskopinegativa.
• Specificiteten för TB är begränsad - ZN skiljer inte M. tuberculosis från miljömykobakterier. Artbestämning kräver odling eller molekylär metod.
• Trots begränsningarna är metoden oumbärlig av två skäl: den är snabb och billig (svar samma dag, fungerar i resursfattig miljö), och den identifierar de mest smittsamma patienterna. En direktmikroskopipositiv patient smittar betydligt mer än en enbart odlingspositiv - därför styr ZN-svaret isoleringsbeslutet.
• Standard är tre sputumprover, helst morgonprover, insamlade olika dagar. Vid negativa svar och kvarstående misstanke: inducerat sputum, bronkoskopi med BAL, eller ventrikelsköljning hos barn.
• Kompletteras idag rutinmässigt med RIF, som är känsligare, artspecifikt och samtidigt detekterar rifampicinresistens på under två timmar.

Klinisk pärla

Smittsamhetsbedömningen bygger på direktmikroskopin, inte på odlingen. En patient som är ZN-positiv i sputum ska isoleras med luftburna försiktighetsåtgärder och smittspåras brett; en som bara är odlingspositiv smittar betydligt mindre. Det gör att ett snabbt ZN-svar har direkt praktisk betydelse för vårdavdelningens rutiner samma dag.

Tenta-fokus

Koppla metoden till strukturen: mykolsyran är orsaken till syrafastheten, till att gramfärgning inte fungerar, till den låga antibiotikapermeabiliteten och till den långsamma tillväxten. Kom också ihåg de andra syrafasta organismerna: Nocardia (delvis), och kryptosporidier/cyclospora/cystoisospora vid diarrédiagnostik hos immunsupprimerade.

Kopplingar

Relaterat: Mykobakterier, Mycobacterium tuberculosis, Mykolsyra, Latent tuberkulos, Gramfärgning, PCR, Basala hygienrutiner