NADH

Kurs: MDBI Del: 03 Klinisk Kemi Avsnitt: 10 Leverfunktion, Pankreas och Klinisk Enzymologi

Vad är det?

NADH är den reducerade formen av nikotinamidadenindinukleotid (NAD⁺), ett koenzym som bär elektroner i cellens redoxreaktioner. Inom klinisk enzymologi är NADH det som gör de flesta enzymanalyser mätbara, eftersom endast den reducerade formen absorberar UV-ljus vid 340 nm.

Mekanism

• NAD⁺/NADH-paret fungerar som väteacceptor respektive vätedonator i glykolysen och i den intermediära metabolismen.
• Den reducerade formen har ett absorptionsmaximum vid 340 nm som den oxiderade saknar. Omvandlingen NADH ⇌ NAD⁺ kan därför följas som en absorbansförändring över tid.
• I kliniska analyser kopplas därför reaktionen av intresse till en NADH-genererande eller NADH-förbrukande delreaktion; hastigheten i absorbansändringen blir proportionell mot enzymaktiviteten.
  • LD: Pyruvat + NADH + H⁺ ⇌ L-laktat + NAD⁺ → absorbansen vid 340 nm minskar.
  • ALAT: pyruvat bildas och tas om hand av hjälpenzymet LD, som förbrukar NADH ekvimolärt.
  • ASAT: oxalacetat bildas och reduceras av hjälpenzymet malatdehydrogenas, likaså med NADH-förbrukning.
  • CK: reaktionen kopplas via två ytterligare enzymsteg till bildning av NADPH → absorbansen ökar vid 340 nm.

Klinisk relevans & Diagnostik

• Analyserna mäter katalytisk aktivitet, inte koncentration, och redovisas i µkat/L (1 kat = 1 mol substrat/s).
• Kinetisk mätning — substrattransformation per tidsenhet — är vanligast; endpoint-mätning används i vissa fall.
• För att absorbansändringen ska spegla enzymmängden måste enzymkoncentrationen vara enda hastighetsbegränsande faktorn: hög substratkoncentration (substratmättnad), låg produktkoncentration samt optimala och standardiserade pH, kofaktorer, jonstyrka och temperatur.
• Störningar i mätningen: lipemi, hemolys och turbiditet påverkar absorbansen och kan ge felaktiga aktivitetsvärden.

Kopplingar

Relaterat: Absorbans, Fotometri, LD, Laktatdehydrogenas, Pyruvat, Glykolys, Isoenzym