Paraffininbäddning

Kurs: MDBI

Typ	Preanalytiskt processteg i histopatologi
Syfte	Ge vävnaden fast stödmedium för tunn snittning
Föregås av	fixering, dehydrering, klarning
Nyckelfynd	Vävnaden gjuts i paraffinblock → snittas i ca 3–4 µm

Vad är det?

• Paraffininbäddning är steget där fixerad och urvattnad vävnad infiltreras och gjuts in i smält paraffin, som sedan stelnar till ett hårt block.
• Blocket ger den mekaniska stadga som krävs för att kunna skära mycket tunna, sammanhängande snitt i mikrotomen.
• Resultatet, ett FFPE-preparat (formalinfixerat, paraffininbäddat), är arbetshästen inom rutinpatologi och kan arkiveras i årtionden.

Princip / Utförande

• Efter fixering går vävnaden genom en automatisk processor:
  1. Dehydrering i stigande etanolserie — vatten byts mot alkohol.
  2. Klarning i t.ex. xylen — alkoholen byts mot ett paraffinlösligt medel.
  3. Infiltration med smält paraffin (ca 58–60 °C) som ersätter xylenet.
• Vävnaden gjuts (bäddas) sedan i en form med den intressanta ytan nedåt och kyls till ett fast block.
• Blocket trimmas och skärs i mikrotomen till band av snitt som flottas på vattenbad och fästs på objektglas.

Indikation / Användning

• Standardmetod för i princip all vävnad som ska rutinfärgas med hematoxylin-eosin och bedömas i ljusmikroskop.
• Blocket är utgångsmaterial för immunhistokemi, in situ-hybridisering och de flesta molekylära analyser på DNA/RNA.

Tolkning / Fallgropar

• Kräver att vävnaden är helt urvattnad — kvarvarande vatten ger dålig infiltration, hårda/smuliga block och trasiga snitt.
• Värmen och fixeringen fragmenterar nukleinsyror, vilket begränsar men inte omöjliggör molekylär analys (till skillnad från färskt/fryst material).
• Fettrik eller förkalkad vävnad (förkalkning, ben) bäddas dåligt; ben måste först avkalkas.
• Alternativet fryssnitt hoppar över inbäddningen för snabbsvar intraoperativt, men ger sämre morfologi.

Tenta-fokus

Kunna hela kedjan fixering → dehydrering → klarning → paraffininfiltration → gjutning → snittning → färgning, och varför paraffinet behövs (stödmedium för tunna snitt). Begreppet FFPE och att metoden fragmenterar nukleinsyror.

Klinisk pärla

Paraffinblocket är en biobank i sig: det arkiveras i åratal, så man kan gå tillbaka och göra nya immunfärgningar eller molekylära tester på en gammal tumör när nya markörer eller behandlingar dyker upp.

Kopplingar

• Formalinfixering — steget före inbäddningen
• Utskärning — där bitar väljs ut och läggs i kassett
• Hematoxylin-eosin — rutinfärgningen som görs på snittet
• Immunhistokemi — utförs på snitt från blocket
• Fryssnitt — snabbalternativ utan paraffin
• Molekylär patologi — nedströmsanalys på FFPE-material