In situ-hybridisering

Kurs: MDBI

Typ	Molekylär diagnostisk metod
Princip	Märkt nukleinsyreprob hybridiserar till komplementär DNA/RNA i vävnaden
Vanliga tillämpningar	HER2-amplifiering, genrearrangemang, virusdetektion (HPV, EBV)

Vad är det?

• In situ-hybridisering (ISH) lokaliserar specifika DNA- eller RNA-sekvenser direkt i vävnadssnitt eller celler, med bevarad morfologi.
• En märkt, komplementär prob binder till målsekvensen och visualiseras.

Princip och utförande

• FISH (fluorescerande) — signal ses i fluorescensmikroskop.
• CISH/SISH (kromogen/silver) — signal ses i vanligt ljusmikroskop.
• Kräver god Fixering och kontroller; skiljer sig från Immunhistokemi som påvisar protein, medan ISH påvisar nukleinsyra.

Indikation och användning

• HER2-genamplifiering vid Bröstcancer/Ventrikelcancer (t.ex. HER2/CEP17-kvot).
• Genrearrangemang/translokationer: ALK, ROS1 vid Lungcancer; break-apart-prober vid Lymfom.
• Virusdetektion: HPV i cervix-/orofarynxtumörer; EBER för EBV i Lymfom/Nasofarynxcancer.
• Deletioner: t.ex. 1p/19q vid Gliom.

Tolkning och fallgropar

• Kvantifiering genom signalräkning (kvoter, break-apart-mönster).
• Fallgropar: otillräcklig Fixering, autofluorescens, feltolkade signaler; kräver adekvata kontroller.

Tenta-fokus

ISH påvisar nukleinsyra (gen/mRNA/virus) i morfologisk kontext — skilj från Immunhistokemi som påvisar protein. Kliniskt klassiskt: HER2-amplifiering och ALK-rearrangemang.

Klinisk pärla

FISH med break-apart-prob används för att påvisa translokationer (t.ex. ALK) även när själva fusionspartnern varierar.

Kopplingar

• FISH — vanligaste fluorescerande varianten
• Immunhistokemi — komplementär metod (protein vs nukleinsyra)
• HER2 — klassisk amplifieringsanalys
• HPV — virusdetektion i tumörer
• Molekylärpatologi — övergripande fält