Fryssnitt

Kurs: Basvetenskap 5 Moment 2

Vad är det?

• Snabb histopatologisk undersökning där färsk, ofixerad vävnad fryses i kryostat (till ca −20 till −30 °C), snittas, färgas och bedöms medan patienten ligger på operationsbordet.
• Svarstid vanligen 10–20 minuter, jämfört med 1–2 dygn för rutinhandläggning med formalinfixering och paraffininbäddning.

Varför är det viktigt / Mekanism

• Frysningen ersätter paraffinets funktion: vävnaden måste vara fast nog att snittas tunt. Vatten i vävnaden fryser till iskristaller, vilket är både metodens möjlighet och dess främsta begränsning.
• Kvalitetsproblemen är förutsägbara ur mekanismen:
  • Iskristallartefakter – vakuoler och kärnförvrängning som kan imitera eller maskera atypi.
  • Sämre färgkvalitet och tjockare, ojämna snitt än paraffinsnitt.
  • Fettrik vävnad fryser dåligt – bröstfett och omentum ger särskilt dålig snittkvalitet.
  • Vävnaden förbrukas eller skadas delvis, vilket kan försämra den slutliga rutindiagnostiken och molekylärpatologin. Detta är ett tungt argument för att inte frysa mer vävnad än nödvändigt.
• Fryssnitt ska besvara en operativ fråga, inte ställa en slutlig diagnos. Frågan måste kunna formuleras så att svaret ändrar operationen omedelbart.

Klinisk relevans & Diagnostik

• Etablerade indikationer:
  • Resektionsmarginalens status – t.ex. vid Mohs kirurgi för Basalcellscancer, huvud-halscancer, konisering, pankreas- och gallgångsresektion.
  • Är detta malignt eller inte? vid en oväntad intraoperativ förändring, t.ex. ovarialtumör där svaret avgör om enkel cystektomi eller fullständig stagingoperation ska göras.
  • Lymfkörtelstatus intraoperativt (historiskt vid Portvaktskörtelbiopsi, numera mindre vanligt sedan axillutrymning avdramatiserats).
  • Är representativ vävnad tagen? – bekräfta att biopsin innehåller tumör, särskilt vid CNS-biopsi eller när material ska vidare till molekylär analys.
  • Identifiera Parathyreoidea mot Tyreoidea mot fett vid halskirurgi.
  • Påvisa ganglieceller vid Hirschsprungs sjukdom.
• Situationer där fryssnitt bör undvikas:
  • Follikulär tyreoideacancer – diagnosen kräver bedömning av kapsel- och kärlinvasion i hela kapseln, vilket inte kan göras på ett fryssnitt.
  • Lymfom – kräver god morfologi plus immunhistokemi och flödescytometri.
  • Små bröstlesioner och mikroförkalkningar – vävnaden förstörs och diagnosen blir opålitlig.
  • När svaret inte påverkar det aktuella ingreppet.
• Diskordans mellan fryssnitt och slutgiltig paraffindiagnos förekommer i ~1–3 %; “deferred”-svar (avvakta rutin) ska betraktas som ett korrekt och ansvarsfullt svar, inte som ett misslyckande.
• Fryst vävnad har också ett annat värde: infrysning i biobank bevarar RNA och protein bättre än formalinfixering, vilket krävs för viss molekylär analys och forskning. Formalin orsakar korsbindningar och DNA-fragmentering.
• Immunfluorescens vid Njurbiopsi och vid bullösa hudsjukdomar kräver fryst material – där är frysningen inte en snabbmetod utan en förutsättning.

Klinisk pärla

Innan man begär fryssnitt bör man kunna svara på frågan: “vad gör jag annorlunda om svaret blir positivt respektive negativt?” Kan man inte det, ska undersökningen inte göras – man riskerar då bara att förbruka diagnostiskt material och att få ett svar som är sämre än det man ändå får i morgon.

Tenta-fokus

Fryssnitt är en intraoperativ beslutsmetod, inte en snabbare rutindiagnostik. Huvudbegränsningen är iskristallartefakter och att vävnad förbrukas. Follikulär tyreoideacancer och lymfom ska inte bedömas på fryssnitt. Immunfluorescens vid njur- och hudbiopsi kräver fryst vävnad.

Kopplingar

Relaterat: Hematoxylin-eosinfärgning, Immunhistokemi, Portvaktskörtelbiopsi, Follikulär tyreoideacancer, Basalcellscancer, Resektionsmarginal, Patolog, Njurbiopsi