DAB
Kurs: MDBI
| Typ | Kromogen (detektionsreagens) i immunhistokemi |
| Står för | 3,3′-diaminobensidin |
| Princip | Oxideras av HRP till ett brunt, olösligt utfällt |
| Nyckelfynd | Ger den klassiska BRUNA infärgningen där antikroppen bundit |
Vad är det?
- DAB (3,3′-diaminobensidin) är den vanligaste kromogenen vid immunhistokemisk (IHC) färgning.
- Den gör ett osynligt antikropps-antigen-komplex synligt genom att fällas ut som ett brunt pigment exakt där antikroppen bundit.
- Bruntonen är permanent och alkohol-olöslig, vilket gör snittet hållbart och möjligt att montera.
Princip och utförande
- Primär antikropp binder till målantigenet; ett detektionssystem kopplar pepparrotsperoxidas (HRP) till platsen.
- HRP + väteperoxid oxiderar DAB, som polymeriseras och fälls ut som ett brunt, olösligt kromogen.
- Hematoxylin används ofta som blå kärnmotfärgning för kontrast mot den bruna signalen.
Användning och tolkning
- Lokaliserar markörer i kärna, cytoplasma eller membran beroende på antigen (t.ex. kärnfärg för Ki-67, membranfärg för HER2).
- Ska tolkas mot positiva och negativa kontroller.
- Alternativa kromogener finns, t.ex. AEC (rött) — används när brunt pigment i vävnaden stör tolkningen.
Fallgropar
- Endogent brunt pigment (melanin, hemosiderin, formalinpigment) kan förväxlas med äkta DAB-signal.
- Endogen peroxidasaktivitet (t.ex. i erytrocyter/granulocyter) måste blockeras för att undvika falsk positivitet.
- Överutveckling ger diffus bakgrund som döljer specifik signal.
Tenta-fokus
DAB + HRP ger den BRUNA IHC-signalen. Kunna kedjan: primär antikropp → HRP-kopplat detektionssystem → DAB oxideras → brunt utfällt där antigenet finns.
Klinisk pärla
Kopplingar
- Immunhistokemi — tekniken DAB tillhör
- Peroxidas — enzymet som oxiderar DAB
- Antikropp — riktar detektionen mot antigenet
- Cellblock — cytologiskt underlag som möjliggör IHC
- Hematoxylin — vanlig motfärgning till DAB