Fluorokrom

Kurs: MDBI

Typ	Fluorescerande färgämne (reagens inom Immunfluorescens, FISH och Flödescytometri)
Princip	Absorberar ljus vid en våglängd och emitterar vid längre våglängd
Nyckelfynd	Signal ses endast i fluorescensmikroskop
Exempel	FITC, DAPI, Akridinorange, rodamin

Vad är det?

• En Fluorokrom (fluorofor) är ett färgämne som exciteras av ljus av en viss våglängd och sänder ut ljus av längre våglängd (lägre energi) — så kallat Stokesskift.
• Molekylen kopplas ofta till en Antikropp (vid Immunfluorescens) eller till en DNA-prob (vid FISH) och används för att lokalisera ett specifikt Antigen eller en genetisk sekvens.
• Skiljer sig från en Kromogen: en kromogen ger en synlig färgfällning i vanligt ljusmikroskop, medan en fluorokrom kräver Fluorescensmikroskopi.

Princip och utförande

• Excitation med ljus av bestämd våglängd (via specifika filter) → elektroner exciteras → emission av fluorescerande ljus när de återgår till grundtillståndet.
• Flera fluorokromer med olika emissionsfärg kan kombineras (multiplex), t.ex. DAPI för kärnor (blå) och FITC för målantigen (grön).
• Kräver fluorescensmikroskop med lämpliga excitations- och emissionsfilter.

Indikation och användning

• Immunfluorescens — t.ex. njurbiopsier vid Glomerulonefrit och hudbiopsier vid bullösa dermatoser.
• FISH — påvisar genamplifieringar, translokationer och aneuploidi, t.ex. UroVysion i Urincytologi.
• Flödescytometri — fluorokrommärkta antikroppar mot ytmarkörer (t.ex. vid Lymfom/Leukemi).
• Auramin-rodamin-färgning — fluorescerande påvisning av syrafasta stavar (Mycobacterium tuberculosis).

Tolkning och fallgropar

• Kräver mörkt rum och rätt filteruppsättning; fel filter → ingen eller falsk signal.
• Autofluorescens från t.ex. Elastin, Lipofuscin och erytrocyter kan ge falsk bakgrund.
• Signalen är inte permanent — den bleknar vid belysning (Fotoblekning).

Tenta-fokus

Kunna skilja fluorokrom (fluorescerande, kräver fluorescensmikroskop) från Kromogen (synlig färgfällning i ljusmikroskop, t.ex. DAB vid Immunhistokemi). De blandas ofta ihop.

Klinisk pärla

Fluorescenssignal bleknar vid belysning (Fotoblekning) — bedöm och fotografera snabbt och förvara preparaten mörkt och kylt.

Kopplingar

• Kromogen — motsvarande princip men för ljusmikroskopi
• Immunfluorescens — huvudtillämpning
• FISH — fluorescensbaserad in situ-hybridisering
• Fluorescensmikroskopi — nödvändig utrustning
• Immunhistokemi — jämförande metod med kromogen