Kromogen

Kurs: MDBI

Typ	Reagens inom Immunhistokemi/Immuncytokemi
Princip	Färglöst substrat omvandlas av enzym till synlig färgfällning
Nyckelfynd	Markerar var Antikropp–Antigen-bindning skett
Exempel	DAB (brun), AEC (röd), Fast Red (röd)

Vad är det?

• En Kromogen är ett färglöst ämne som via ett enzym omvandlas till en färgad, olöslig fällning på det ställe där en Antikropp bundit sitt Antigen i vävnaden eller cellutstryket.
• Gör antigen–antikroppsreaktionen synlig i vanligt ljusmikroskop — till skillnad från fluorokromer som kräver Fluorescensmikroskopi.

Princip och utförande

• Primär (och ofta sekundär) Antikropp binder Antigen; ett kopplat enzym tillsätts — vanligen pepparrotsperoxidas (HRP) eller Alkaliskt fosfatas.
• Enzymet omvandlar kromogenen till en färgfällning: DAB (3,3´-diaminobensidin) → brun (HRP); AEC → röd; Fast Red → röd (Alkaliskt fosfatas).
• Motfärgning med Hematoxylin ger blå kärnor som bakgrund.

Indikation och användning

• Immunhistokemi och Immuncytokemi för att påvisa markörer, t.ex. Calretinin/WT-1 (mesotel) mot Ber-EP4/MOC-31 (Adenocarcinom) i serösa vätskor.
• Subtypning av tumörer, Receptorstatus (ER/PR/HER2) och ursprungsmarkörer.

Tolkning och fallgropar

• DAB ger en permanent, alkoholtålig brun fällning — standard; AEC är alkohollöslig och kräver vattenlöslig montering.
• Endogent peroxidas (i t.ex. erytrocyter och granulocyter) kan ge falsk brun bakgrund — blockeras före färgning.
• Bedöm alltid infärgningens lokalisation (kärna vs cytoplasma vs membran) mot förväntat mönster för markören.

Tenta-fokus

Kromogen (ljusmikroskop, färgfällning, t.ex. DAB brun) vs Fluorokrom (fluorescensmikroskop). DAB + HRP → brunt är standardkombinationen inom Immunhistokemi.

Klinisk pärla

Brun infärgning behöver inte betyda positivitet — Melanin, Formalinpigment och Endogent peroxidas kan lura. Korrelera alltid mot förväntad cellulär lokalisation.

Kopplingar

• Fluorokrom — motsvarighet för fluorescensmetoder
• Immunhistokemi — huvudtillämpning
• DAB — vanligaste kromogenen
• Peroxidas — enzym som driver färgreaktionen
• Motfärgning — hematoxylin som bakgrund