Giemsa-färgning

Kurs: Basvetenskap 6

Vad är det?

• Giemsa-färgning är en Romanowsky-färgning som används för att färga blodutstryk, benmärg och vissa mikroorganismer.
• Utvecklad av Gustav Giemsa för Malaria-diagnostik; fortfarande Gold standard för mikroskopisk malariadiagnos.

Princip

• Färglösningen innehåller Metylenblått, dess oxidationsprodukt Azur B och Eosin.
• Azur B är basiskt och binder till sura strukturer — DNA och RNA — vilket färgar cellkärnor och parasitkromatin mörkt blå-lila.
• Eosin är surt och binder till basiska strukturer — Hemoglobin och eosinofila granula — vilket ger rosa-röd färg.
• Kombinationen ger den karakteristiska “purpurfärgen” på nukleärt material (Romanowsky-effekten).

Utförande

• Tjock droppe (thick film) — hemolyserad, oiktad; koncentrerar parasiter och används för att avgöra OM parasiter finns samt räkna Parasitemi.
• Tunt utstryk (thin film) — fixeras i Metanol först; bevarar erytrocytmorfologi och används för Artbestämning.
• pH är kritiskt: buffert pH 7,2 krävs för att Schüffners prickar och Maurers fläckar ska framträda.
• Färgningstid 10 % Giemsa i 10 minuter, eller 3 % i 30–45 minuter.

Tolkning — vad kan påvisas

• Plasmodium-arter: ringformer, trofozoiter, schizonter och Gametocyter; bananformad gametocyt är patognomon för Plasmodium falciparum.
• Mikrofilarier vid Lymfatisk filariasis, Loiasis och Onkocerkos — skidans närvaro och svanskärnornas mönster avgör art.
• Trypanosoma (afrikansk och amerikansk), Babesia, Leishmania-amastigoter i benmärg/mjältaspirat.
• Intracellulära bakterier: Chlamydia trachomatis-inklusioner, Borrelia, Rickettsia, Histoplasma capsulatum.
• Rutinhematologi: Blodutstryk för Leukemi-diagnostik och differentialräkning.

Fallgropar

• Fel pH ger utebliven färgning av Schüffners prickar → missad artdiagnos av Plasmodium vivax.
• Trombocyter ovanpå erytrocyter kan förväxlas med Plasmodium-ringar.
• Gammal, färgutfälld lösning ger artefakter som misstolkas som parasiter.
• Vid låg Parasitemi krävs granskning av minst 100–200 synfält innan negativt svar; upprepa prov var 12:e–24:e timme x3.
• Vid Plasmodium falciparum kan sekvestrering i kapillärer ge falskt låg parasitemi i perifert blod.

Klinisk pärla

Kombinera alltid Giemsa-mikroskopi med Snabbtest (RDT för HRP2/pLDH). Snabbtestet ger svar på minuter men kan vara falskt negativt vid pfhrp2-deletion; mikroskopin ger art och parasitemigrad, som styr om patienten ska ha intravenös Artesunat.

Tenta-fokus

Tjock droppe = detektion och parasitemi (högre känslighet). Tunt utstryk = artbestämning (bevarad erytrocytmorfologi). Detta är en klassisk tentafråga och det är lätt att kasta om dem.

Kopplingar

• Malaria — huvudindikationen
• Plasmodium falciparum — arten med farligast förlopp
• Mikrofilarier — påvisas med samma färgning
• Nokturn periodicitet — styr provtagningstid för filarier
• Leishmania — amastigoter i benmärgsutstryk