Genrearrangemang

Kurs: MDBI

Typ	Molekylär klonalitetsanalys / fysiologisk V(D)J-rekombination
Nyckelfynd	Monoklonal topp = neoplastisk; polyklonalt spektrum = reaktivt
Målgener	IGH, IGK (B-celler); TCR (T-celler)
Metod	PCR + fragmentanalys (BIOMED-2)

Vad är det?

• Under normal lymfocytmognad sker V(D)J-rekombination: gensegment för immunglobulingener (B-celler) respektive T-cellsreceptorgener (T-celler) klipps och fogas samman till en unik receptor per klon.
• I hematopatologin utnyttjas detta som klonalitetsanalys: eftersom varje lymfocytklon får ett unikt rearrangemang med specifik längd kan man skilja en monoklonal (neoplastisk) population från en reaktiv polyklonal blandning.
• Analysen är ett komplement när morfologi, Immunhistokemi och Flödescytometri inte räcker för att avgöra om en lymfoproliferation är benign eller malign.

Princip och utförande

• DNA extraheras och PCR amplifierar de rearrangerade regionerna med konsensusprimrar (standardiserat via BIOMED-2/EuroClonality) mot IGH (VH–JH), IGK samt TCRB och TCRG.
• Produkterna storlekssepareras med kapillärelektrofores (fragmentanalys) eller heteroduplexanalys.
• Monoklonalt resultat = en (eller två) dominerande, reproducerbara toppar. Polyklonalt = en gaussisk (klockformad) fördelning av många toppar.

Indikation och användning

• Oklar lymfadenopati eller infiltrat där B- eller T-cellsklonalitet behöver bevisas.
• Linjebestämning och diagnostiskt stöd vid lymfom och lymfatiska leukemier.
• Spårning av kvarvarande sjukdom med klonspecifik markör.

Tolkning och fallgropar

• Klonal ≠ alltid malign: klonala expansioner kan ses reaktivt (vissa infektioner, hos äldre, kutant pseudolymfom).
• Pseudoklonalitet vid låg cellmängd — få lymfocyter ger slumpmässiga falska toppar; kräver bekräftelse på nytt prov.
• Falskt negativt vid somatisk hypermutation (primerfäste förstörs) i groddcentrumhärledda B-cellslymfom.
• Resultatet ska alltid vägas mot morfologi och klinik.

Tenta-fokus

Kärnprincipen: en monoklonal topp talar för neoplasi medan ett polyklonalt (klockformat) mönster talar för reaktiv process. Kunna markörparen: IGH/IGK för B-celler och TCR för T-celler.

Klinisk pärla

“Klonalitet bevisar inte malignitet.” Ett klonalt rearrangemang måste tolkas i sitt kliniska och morfologiska sammanhang — annars övertolkas en godartad reaktiv klon.

Kopplingar

• Monoklonal — genrearrangemang är det molekylära beviset för monoklonalitet
• Lätt kedjerestriktion — parallell metod för att visa B-cellsklonalitet
• Flödescytometri — kompletterande klonalitetsbedömning
• MRD — klonspecifikt rearrangemang används för känslig uppföljning
• Hematolymfoid — analysen appliceras på hematolymfoida proliferationer
• Brottpunkt — jämför med kromosomala rearrangemang/translokationer