Gramfärgning

Kurs: Basvetenskap 6

Vad är det?

• Gramfärgning är en differentialfärgning som delar in bakterier i grampositiva och gramnegativa utifrån cellväggens uppbyggnad. Uppfanns av Hans Christian Gram 1884 och är fortfarande den snabbaste kliniska klassificeringsmetoden.

Varför är det viktigt / Mekanism

Fyra steg:

1. Kristallviolett tillsätts – alla bakterier färgas lila.
2. Jod (Lugols lösning) tillsätts – bildar ett stort kristallviolett-jodkomplex inuti cellen.
3. Avfärgning med alkohol/aceton – detta är det avgörande steget. Hos grampositiva bakterier dehydreras och krymper det tjocka peptidoglykanlagret så att komplexet fastnar inuti. Hos gramnegativa löser alkoholen upp det lipidrika yttre membranet, och det tunna peptidoglykanlagret kan inte hålla kvar färgen – cellen avfärgas.
4. Motfärgning med safranin/karbolfuksin – de nu färglösa gramnegativa bakterierna färgas röda/rosa.

Resultat: grampositiva = blå/lila, gramnegativa = röda/rosa.

Klinisk relevans & Diagnostik

• Utförs direkt på likvor, sputum, sårsekret, ledvätska eller blododlingsflaska och ger svar inom minuter – styr valet av empirisk antibiotika.
• Falskt gramnegativt kan uppstå vid för lång avfärgning eller om provet tas från en gammal kultur där grampositiva celler börjat lysera.
• Vissa bakterier syns inte alls: Mycoplasma pneumoniae (saknar cellvägg), Chlamydia trachomatis (intracellulär, för liten), Treponema pallidum (för tunn – kräver mörkfältsmikroskopi) och Mycobacterium tuberculosis (kräver syrafast färgning).

Tenta-fokus

Det är avfärgningssteget med alkohol som skapar skillnaden, inte själva färgupptaget – alla bakterier tar upp kristallviolett initialt. Detta är en klassisk feluppfattning.

Klinisk pärla

Grampositiva diplokocker i likvor hos en vuxen med nackstelhet talar starkt för Streptococcus pneumoniae; gramnegativa diplokocker talar för Neisseria meningitidis – en fyndighet som direkt påverkar antibiotikavalet.

Kopplingar

Relaterat: Klassificering av bakterier, Grampositiva bakterier, Gramnegativa bakterier, Peptidoglykan, Lipopolysackarider (LPS), Bakterier